잉어에서의 SVCV 검출 및 새로운 주화세포에서의 배양 특성
- Alternative Title
- Detected SVCV in carp and its culturing characteristics in new cell lines
- Abstract
- After mass mortality of domestic SVCV was detected from the surviving wild common carp, we analyzed molecular biologically through the detection of SVCV-K1 similar SVCV isolates from wild carp(Cyprinus carpio) of Cheongdo dam reservoir, North Gyeongsang Province. And we checked the this virus belongs to the subgroupⅠa and confirmed the pathogenecity by observed the CPE in vitro culture and cumulative mortality rate in vivo challenged with koi carp. Domestic detection of wild carp will SVCV in the first report, which is considered as a important virus in study of SVCV in domestic cyprinid fish.
In addition, in order to higher concentration of SVCV than EPC cell line, israel carp embryo cell and goldfish tail fin cell are established and compared with host cell lines. When inoculated with MEM used for SVCV-K1 on GTF and ICE cell developed in this study, we showed a similar maximum viral copy numbers of SVCV-K1 in the EPC. MEM medium in cell line was changed to serum free medium (SFM). Following inoculation with SVCV-K1 in SFM, CPE was observed in cell lines within 3 days. Certainly, utilization of SFM allowed us to increase susceptibility of GTF, ICE and EPC cell lines to the inoculation of SVCV-K1 in SFM. The susceptibility of the SVCV-K1 in GTF, ICE cells was higher than EPC cell. Although known as the goldfish susceptible to the disease is caused by the SVCV since the disease was recorded in goldfish in a lake in Brazil in 1998, goldfish is lower susceptible to SVCV than carp. This results in higher sensitivity to SVCV-K1 in GTF cell derived from a goldfish than in EPC cell derived from carp is considered a very interesting point. Therefore, inuculation of SVCV-K1 in GTF, ICE cell and using SFM is thought to be higher applied to a variety of research and utilization of SVCV-K1.
- Author(s)
- 변지희
- Issued Date
- 2015
- Awarded Date
- 2015. 2
- Type
- Dissertation
- Publisher
- 부경대학교
- URI
- https://repository.pknu.ac.kr:8443/handle/2021.oak/12158
http://pknu.dcollection.net/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000001967777
- Alternative Author(s)
- Byun, Ji Hee
- Affiliation
- 부경대학교
- Department
- 대학원 수산생명의학과
- Advisor
- 정현도
- Table Of Contents
- Abstract
Ⅰ. 서 론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 5
1. 바이러스 검출 및 분석 5
1.1. 감염어 조직 분리 5
1.2. 바이러스 RNA 분리 5
1.3. PCR 6
1.4. Cloning 8
1.5. 염기서열 분석과 계통수 제작 9
1.6. Real-time PCR 10
2. 바이러스 분리 11
2.1. 바이러스와 주화세포 11
3. 공격실험을 통한 폐사율 확인 12
3.1. 실험어와 바이러스 12
3.2. 잉어의 폐사율 확인 13
4. SVCV-K1의 배양 특성 및 감수성 증대 14
4.1. 바이러스와 주화세포 14
4.2. 자어세포와 지느러미세포의 초대 배양 15
4.3. 주화세포와 초대 배양 세포의 감수성 비교 16
4.4. 주화세포와 초대 배양 세포의 감수성 증대 17
5. 금붕어 지느러미와 향어 자어 유래의 주화세포 확립 18
5.1. 금붕어 지느러미세포와 이스라엘잉어 자어세포의 초대 배양 18
5.2. GTF와 ICE cell의 배양 20
5.3. GTF와 ICE cell에 대한 SVCV의 감염성 21
5.3.1. 바이러스 21
5.3.2. GTF와 ICE cell에 대한 SVCV-K1 감염성 확인 22
5.3.3. GTF와 ICE cell에 대한 SFM 처리 23
5.3.4. GTF와 ICE cell의 바이러스 생산량 비교 24
Ⅲ. 결 과 25
1. Spring viremia of carp virus의 identification 25
1.1. PCR amplification 25
1.2. SVCV의 계통발생학적 분석 27
2. SVCV의 분리 32
3. 비단잉어의 SVCV-K1에 대한 폐사율 확인 34
4. SVCV-K1의 배양 특성 및 감수성 증대 38
4.1. 주화세포와 초대배양 세포의 감수성 비교 38
4.2. 주화세포와 초대배양 세포의 감수성 증대 40
5. GTF와 ICE cell의 확립 및 SVCV-K1 배양 특성 42
5.1. GTF와 ICE cell의 확립 42
5.2. GTF와 ICE cell의 SVCV-K1에 대한 감염성 확인 47
5.3. SFM 처리 48
5.4. GTF와 ICE cell의 바이러스 생산량 비교 52
Ⅳ. 고 찰 54
Ⅴ. 요 약 63
Ⅵ. 감사의 글 64
Ⅶ. 참고 문헌 66
- Degree
- Master
-
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- 대학원 > 수산생명의학과
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