Simultaneous determination of trichlorfon and dichlorvos residues in Olive Flounder (Paralichthys olivecues) by LC-MS/MS : Validation and application to pharmacokinetic study

Abstract

Trichlorfon은 어류의 기생성 질병의 치료에 사용되는 구충제로, choline-esterase 활성을 저하시키는 유기인계 물질이다. 흡충, 조충, 선충, 구두충 등 acetylcholine을 신경전달물질로 이용하는 기생생물에 약효를 발휘한다. 이는 물속에서 점차 dichlorvos로 전환되고 trichlorfon 보다 약 100배이상의 강력한 AChE 억제제이다. Trichlorfon의 dichlorvos의 전환은 수중 내의 수온, pH, 주광 및 산소량에 크게 영향을 받는다. 국내에서 Trichlorfon은 담수어인 잉어 및 뱀장어 사용 용법∙용량이 설정되어 있으나, 해산어류에 대해서 용법∙용량에 대한 연구없이 사용되고 있는 실정이다. 따라서 본 실험의 목적은 LC-MS/MS를 이용한 넙치 내의 trichlorfon과 dichlorvos의 잔류량 분석법을 개발하고 이에 따른 약물동태학적 특성을 연구하였다. 분석용 Column은 Eclipse Plus C18 column (2.1 x 100mm, 1.8µm)를 사용하였고, 이동상 용매조성으로는 0.1% formic acid를 포함한 water과 0.1% formic acid를 포함한 acetonitrile 으로 flow rate는 0.3mL min-1 의 기울기(gradient)조건으로 분석하였다. 시료 전처리 과정에서는 유기용매, 원심분리기, 회전감압농축기를 사용하였다. Trichlorfon과 dichlorvos의 ESI-MS/MS spectrum은 positive 이온화 모드에서 분석을 하였다. Trichlorfon의 딸이온은 m/z 109, 221 및 79로 나타났으며 어미이온으로부터 m/z 109가 이온세기가 가장 크고 안정하기 때문에 Trichlorfon의 정량이온(quantification)으로 선택하였다. Dichlorvos의 딸이온은 m/z 108.9, 79.1로 정량이온은 108.9로 선택하였다. 표준곡선은 trichlorfon과 dichlorvos의 표준용액의 각 농도 (0.1 - 100 μg l-1) 에 따라 측정한 후 얻은 상관계수 R2 값은 0.999의 높은 직선성을 보여주었다. Trichlorfon과 dichlorovos의 검출한계는 각각 0.5 μg kg-1, 1.2 μg kg-1 나타났고, 정량한계는 1.7 μg kg-1 와 4.0 μg kg-1 로 나타났다. Trichlorfon과 dichlorvos의 넙치 혈장, 근육 및 간의 평균회수율은 88.2 – 114%로 변동계수는 13.8% 이하로 나타났다. 그리고 분석방법을 적용하여 넙치에 trichlorfon의 농도에 따른 침지법으로 시간에 따른 약물동태학적 특성을 알아보았다. 본연구에서 실험한 분석방법으로 수산용 동물용 의약품의 잔류허용기준을 설정하는데 실용적인 기본자료로 활용될 수 있을 것이다.