PUKYONG

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Abstract: 저온성균으로부터 유래한 저온 적응 효소는 30℃ 이하에서 최적 활성을 나타낸다. 필수 효소(57%(7개 중 4개))는 비 필수 효소(34%(45개 중 16개))보다 저온 활성을 더 잘 나타내는 경향이 있다. 비 필수효소가 저온 활성을 가지지 않는다면, 그 효소의 동질효소는 저온 활성을 가질 확률이 매우 높다. Colwellia psychrerythraea strain 34H의 Colwellia shikimate kinase (CSK)는 저온 활성을 가지는 필수 효소이고, 최적 활성 온도는 27℃인 저온 적응 효소이다. CSK는 5℃에서 26%의 활성을 보였고, 저온 적응 효소의 특징인 불안정성을 나타내었다. CSK의 녹는점은 33℃(중온성균의 SK보다 낮음)이고, ΔGH2O (변성제 없이 변성)는 + 0.3547 cal/mol(중온성균 EcSK보다 약 1000배 낮음) 이다. 추가적으로 CSK의 저온 활성은 서열과 구조를 기초로 하여 예측할 수 있다.

Keyword: cold-adapted enzymes psychrophilic enzymes essential enzymes nonessential enzymes

URI: https://repository.pknu.ac.kr:8443/handle/2021.oak/13222
http://pknu.dcollection.net/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000002299224

Table Of Contents: Chapter 1: Introduction 1
1.1. Research overview 1
1.2. Literature review 4
1.2.1 Cold-adapted enzyme 4
1.2.2 Essential vs nonessential enzymes 5
1.2.3 Shikimate Kinase 6
1.3. Outline of thesis 7
Chapter 2: Methodology 8
2.1. Materials 8
2.2. Instruments 8
2.3. Experimentals 9
2.3.1. Cloning, expression, and purification of CSK 9
2.3.2. Activity Assay of CSK at Various Temperature 11
2.3.3. Thermal Unfolding of CSK by CD Spectroscopy 12
2.3.4. Urea Unfolding of CSK by Fluorescence Spectroscopy 13
2.3.5. Homology Modelling of CSK 13
Chapter 3: Result and Discussion 15
3.1. Sequence Analysis 15
3.2. Transformation, Expression, Purification 19
3.3. Activity of CSK at Various Temperatures 20
3.4. Thermal Unfolding of CSK by CD Spectroscopy 23
3.5. Urea Unfolding of CSK by Fluorescence Spectroscopy 25
3.6. Homology Modelling of CSK 27
Chapter 4: Conclusions and Outlooks 32
Chapter 5: References 35
Acknowledgement 48
Attachments 1 49
Attachments 2 55
Attachments 3 56

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