비메틸화 CpG 첨가제와 OVA 항원이 도입된 dodecynyl modified 면역활성 DNA 나노입자의 제조
- Abstract
- We introduce a versatile carrier system based on DNA nanoparticles (NPs). Incorporation of lipid-modified nucleobases to DNA strands enables formation of micelles in uniform size. In a single self-assembly step the micelles can be equipped with immune adjuvant (CpG ODN 1826) and fluorescent probe through Watson-Crick base-pairing. With the NPs we have investigated effect of the CpG concentration in immunostimulation. We observed dose dependent activation of TLR-9 resulting in DC maturation in vivo.
- Issued Date
- 2016
- Awarded Date
- 2016. 8
- Type
- Dissertation
- Publisher
- 부경대학교 대학원
- Affiliation
- 부경대학교 대학원
- Department
- 대학원 화학과
- Advisor
- 곽민석
- Table Of Contents
- Ⅰ. 서론 1
1. 연구 배경 1
2. 연구 개요 2
3. 이론적 배경 4
3.1. CpG ODN & TLR-9 4
3.2. 수지상세포의 활성 5
Ⅱ. 실험 방법 7
1. DNA 나노입자의 제조 7
1.1. 지질 DNA의 합성 7
1.2. U4T, eCpG의 합성과 정제 9
1.3. U4T-eCpG 나노입자의 제조 14
1.4. Serum degradation 테스트 17
1.5. Td-CpG 비교 19
2. OVA가 추가된 U4T-eCpG-eOVA의 조제 20
2.1. Azido-OVA 20
2.2. Hexynyl-cU4T 21
2.3. Click reaction 21
3. 동물 실험을 통한 면역 활성 측정 방법 25
3.1. 동물 준비 25
3.2. 항체 준비 25
3.3. 수지상세포 전처리 및 유세포 분석 26
3.4. 사이토카인 분석 27
3.5. 비장세포 내 싸이토카인의 염색 28
3.6. BMDC 테스트 28
Ⅲ. 실험 결과 및 토의 29
1. U4T-eCpG 나노입자의 수지상세포 섭취 29
2. CpG 함량에 따른 면역활성 차이 31
3. 싸이토카인의 분비 33
4. eCpG 단일가닥과 U4T-eCpG 면역 활성 비교 35
5. Td-CpG와 U4T-eCpG 면역 활성 비교 36
6. BMDC 테스트 37
Ⅳ. 결론 39
Ⅴ. 참고문헌 41
감사의 글 47
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