Immune-stimulation and therapeutic nanoparticles with lipid-DNA, unmethylated CpG and OVA antigen
- Alternative Title
- 비메틸화 CpG와 항원 OVA 나노입자의 면역 자극과 면역 치료
- Abstract
- 지질을 함유한 DNA 는 양친매성 물질로, 수용액 상에서 지질로 이루어진 소수성 중심과 DNA 로 이루어진 친수성 껍질로 이루어진 나노입자를 형성한다. 이러한 나노입자를 보조제나 항원을 전달하는 운반체로 사용할 수 있다. 항원이나 보조제를 나노입자를 통해서 운반하는 방법은 두 종류가 존재하는데, 하나는 지질 DNA 나노입자와 상보적인 염기서얼에 보조제를 합성하여 자가조립으로 보조제가 포함된 면역 자극 나노입자를 제조할 수 있다. 다른 방법은 보조제에 지질을 함유하게 하여 면역 자극 나노입자를 제조하는 것이다. 이러한 방법들로 제조한 면역 자극 나노입자의 물리적인 특성을 여러 가지의 분석기기로 측정한다. 또한 세포실험과 동물실험을 통해 보조제가 포함된 면역 자극 나노입자가 수지상세포를 활성화하는 것을 관찰한다. 더 나아가, 보조제가 도입된 나노입자에 항원을 더 첨가하여 면역 자극으로 끝내는 것이 아니라 종양의 성장과 전이를 억제할 수 있는 물질을 만들 수 있다. 항원과 보조제가 도입된 나노입자 또한 동물실험을 통해 면역 치료가 되는 지를 관찰한다.
The present study report the preparation of CpG-incorporated lipid DNA nanoparticles (NPs) as immunostimulant. Amphipilic lipid DNAs formed micelles in aqueous solution by the bydrophobic core of lipid uracil and hydrophilic strands of DNA. The NPs (micelles) could be incorporated with CpG-motif adjuvant during synthesis or self-assembly with CpG DNA. The activation of plasmacytoid dendritic cells (pDCs) by NPs containing CpG-motif ex vivo was investigated. As a result, the hybridization of CpG-motif and OVA-incorporated NPs inhibited tumor growth and its metastasis.
- Issued Date
- 2018
- Awarded Date
- 2018.2
- Type
- Dissertation
- Publisher
- 부경대학교
- Alternative Author(s)
- Kim Hae Joo
- Affiliation
- 부경대학교 대학원
- Department
- 대학원 화학과
- Advisor
- 곽민석
- Table Of Contents
- I. Introduction 1
1. DNA 1
2. Immunotherapy 2
2.1. Immune System 2
2.2. Dendritic Cells 2
2.3. Adjuvant 3
2.4. Antigen 4
2.5. Combination of Adjuvant and Antigen 5
II. Modular Delivery of CpG and OVA Hybridized Lipid DNA Nanoparticle 6
1. Introduction 6
1.1. Lipid DNA as Nanocarrier 6
1.2. CpG DNA Decorated to Lipid DNA Nanoparticle for Immune Stimulation 8
1.3. Peptide Nucleic Acid (PNA) 12
1.4. OVA PNA 13
1.5. Immunotherapeutic Nucleic Acid (INA) 14
2. Preparation of INA & Analysis 17
2.1. Preparation of INA 17
2.2. Analysis Equipment 17
2.3. Measurement and Analysis 18
2.3.1. Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) 18
2.3.2. Dynamic Laser Scattering (DLS) 18
2.3.3. Transmission Electron Microscopy (TEM) 19
2.3.4. Serum Stability 19
2.4. Result and Discussion 20
2.4.1. Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) 20
2.4.2. Dynamic Laser Scattering (DLS) 22
2.4.3. Transmission Electron Microsocopy (TEM) 24
2.4.4. Serum Stability 25
3. Immunotherapy Effect for Cancer in vivo 26
3.1. Preparation of INA 26
3.2. Preparation of Mice 27
3.3. Antigen-Specific Immune Activation 28
3.4. Anti-Tumor Effect of INA 31
III. Nanocarriers Containing CpG-Motif for Immune Activation 34
1. Information 34
2. Preparation and Analysis of Lipid CpG NP 36
2.1. Purification 36
2.1.1. Deprotection 36
2.1.2. Ethanol Precipitation 36
2.1.3. Denaturing PAGE 37
2.1.4. PAGE Purification 37
2.2. Analysis Equipments 38
2.3. Analysis 39
2.3.1. PAGE 39
2.3.2. UV-Vis Spectroscopy 39
2.3.3. MALDI-ToF 39
2.4. Preparation and Morphology Analysis 40
2.4.1. Preparation 40
2.4.2. DLS and zeta potential 40
2.4.3. Transmission Electron Microscopy (TEM) 40
2.5. Immune Activation by Lipid CpG NP 41
2.5.1. Separation Cell to Human Blood 41
2.5.2. Cell Uptake 42
2.5.3. pDC Activation 43
3. Results and Discussion 44
3.1. Measurement and Analysis 44
3.1.1. PAGE 44
3.1.2. Absorbance 45
3.1.3. MALDI-ToF 47
3.1.4. DLS and Zeta Potential 48
3.1.5. TEM 50
3.2. Immune Activation by Lipid CpG NP ex vivo 51
3.2.1. Cell Uptake 51
3.2.2. pDC Activation 54
IV. Conclusions 56
V. References 57
- Degree
- Master
- Files in This Item:
-
-
Download
Immune-stimulation and therapeutic nanoparticles with lipid-DNA, unmethylated CpG and OVA antigen.pdf
기타 데이터 / 3.26 MB / Adobe PDF
-
Items in Repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.