먹장어로부터 유래한 단백질인산화효소C beta1의 분자생물학적 클로닝, 발현 및 효소학적 분석

Abstract

먹장어는 척색동물과 원구류에 속하며, 때문에 발생학과 생물학적 진화를 연구하는 데에 있어 중요한 생물로 여겨진다, 단백질인산화효소 C는 세포신호전달을 통해 세포증식, 세포자멸, 세포의 분화, 이동, 그리고 염증반응 등과 관련한 광범위한 생물학적 기능을 수행한다. 본 연구에서는 conventional class에 속하는 PKC βI과 PKC βII를 클로닝하였다. 그 결과, EbPKCβI과 EbPKCβII는 C1, C2, C3, 그리고 C4 도메인 상에서 동일한 서열을 가지지만, C-terminal상의 V5 도메인에서는 전혀 다른 서열을 가짐을 밝혔다. EbPKCβI과 EbPKCβII는 발현용 벡터인 pET32b(+)에 클로닝하여 E. coli BL21(DE3)을 이용해 발현하였다. 두 재조합 단백질의 사이즈는 His-tag, S-tag과 Trx tag을 포함하여 약 92kDa이다. 재조합 단백질은 His-tag 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다.