PUKYONG

넙치, Paralichthys olivaceus 병어에서 분리된 Streptococcus parauberis의 특성

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Alternative Title
Characteristics of Streptococcus parauberis isolated from infected olive flounder, Paralichthys olivaceus
Abstract
Streptococcal diseases are serious problems in fresh water and marine fish culture industry worldwide. In recent years, the importance of infection caused by Streptococcus parauberis has increased since severe outbreaks in cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus) were recorded in Korea. The aims of the present study were to investigate phenotypic characteristics of S. parauberis, and pathogenic and immunological characteristics between S. parauberis and S. iniae. In this study, S. parauberis isolated from infected olive flounder was identified by biochemical and genotypic characteristics and was investigated the characteristics of morphological, physiological, protein profile and enzyme activity of ECP. Immune responses of the fish to the pathogen was characterized by bactericidal activity in the serum, phagocytic activity and reactive oxygen intermediaters (ROIs) production of olive flounder. S. parauberis strains used in this study were overall very similar on the basis of biochemical characteristics. S. parauberis appeared α or γ hemolytic activity whereas S. iniae showed β hemolytic activity. A multiplex PCR-based method using 4 different primer sets was performed for rapid detection of various Gram-positive cocci fish pathogens, i.e. Lactococcus garviae, S. iniae and S. parauberis. The protein profiles of formalin killed cells of S. parauberis presented two major bands around 47 KDa, and overall the profiles were very similar to the reference strain. The optimum temperature and salinity for the growth of strains were 27 ℃ and 0 % NaCl, and they did not grow at 45 ℃ and 10 % NaCl, respectively. The capsule of both S. parauberis and S. iniae seems to be associated with the ability to resist killing by normal sera. Also, capsulated strains could survive in phagocytes and induce low ROIs production.
Author(s)
황성돈
Issued Date
2007
Awarded Date
2007. 2
Type
Dissertation
Keyword
Streptococcus parauberis capsule 넙치 infected olive flounder Paralichthys olivaceus
Publisher
부경대학교 대학원
URI
https://repository.pknu.ac.kr:8443/handle/2021.oak/3520
http://pknu.dcollection.net/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000001953407
Alternative Author(s)
Hwang, Seong-Don
Affiliation
부경대학교 대학원
Department
대학원 어병학과
Advisor
박수일
Table Of Contents
Ⅰ. 서론 = 1
Ⅱ. 재료 및 방법 = 4
1. 시험 균주 = 4
2. 세균의 형태학적 검사 = 4
3. 생화학적 특성 검사 = 6
4. TEM을 이용한 capsule의 유무 관찰 = 7
5. Multiplex PCR법을 통한 세균의 동정 = 8
5-1. DNA 분리 = 8
5-2. Primers의 준비 = 8
5-3. PCR = 8
6. SDS PAGE = 10
6-1. FKC 제작 = 10
6-2. 시험균의 protein 분석 = 10
7. 배양 조건별 발육 시험 = 11
8. S. parauberis extracellular products(ECPs)의 특성 = 11
8-1. ECPs의 추출 및 단백질 정량 = 11
8-2. API zym kit에서 효소 활성 = 12
8-3. Proteolytic activity = 12
8-4. Gelatinase activity = 12
8-5. Phospholipase and lipase activity = 13
8-6. ECPs의 in vitro cytotoxicity = 13
9. 시험 균주의 넙치 혈청에 대한 저항성 시험 = 14
9-1. 혈청의 준비 = 14
9-2. 혈청에서의 생존능 시험 = 14
9-3. 넙치 혈청에 대한 시험균의 반응 시간별 균 수 변화 시험 = 15
10. 시험 균주의 식균율과 식균 지수의 측정 = 15
11. 넙치 두신 macrophage에서의 시험 균주별 ROIs 생성능 측정 = 15
11-1. 넙치 두신 macrophage의 분리 = 15
11-2. 시험균의 준비 및 시험균의 감작 = 16
11-3. Chemiluminescence (CL) response = 16
11-4. Nitroblue tetrazolium (NBT) response = 17
12. 병원성 시험 = 17
13. 통계학적 분석 = 18
Ⅲ. 결과 = 19
1. 생화학적 특성 = 19
2. TEM을 이용한 capsule의 유무 관찰 = 21
3. Mutiplex PCR = 21
4. SDS PAGE = 24
5. S. parauberis 성장 조건 = 26
6. ECPs 효소 활성 = 28
6-1. 시험균의 ECPs의 세포독성 시험 = 28
7. 넙치 혈청에 대한 시험균의 저항성 시험 = 31
7-1. 혈청에서의 생존능 시험 = 31
7-2. 혈청에 대한 시험균의 시간별 균 수 변화 = 33
8. 넙치 혈액 식세포의 식균율과 식균 지수 = 35
8-1. 넙치 식세포의 시험 균주에 대한 식균율 = 35
8-2. 넙치 혈액 식세포의 식균 지수 = 37
9. 넙치 두신 macrophage에서의 시험 균주별 ROIs 생성능 측정 = 38
9-1. Chemiluminescence (CL) response = 38
9-2. Nitroblue tetrazolium (NBT) response = 39
10. 병원성 시험 = 40
Ⅳ. 고찰 = 42
Ⅴ. 요약 = 49
Ⅵ. 감사의 글 = 51
Ⅶ. 참고 문헌 = 53
Degree
Master
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대학원 > 어병학과
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