별 불가사리 (Asterina pectinifera) 촉수로부터 항균성 펩타이드와 근수축 펩타이드의 정제 및 특성
- Alternative Title
- Purification and characterization of a novel antimicrobial peptide and a neuropeptide from the tubefeet of starfish, Asterina pectinifera
- Abstract
- A novel neuropeptide, named starfish tubefeet neuropeptide (SFTN) with contractile activity on the dorsal retractor muscle (DRM) of starfish was isolated from the acidified tubefeet extract of starfish, Asterina pectinifera.
To purify the contractile peptide, the acidified extract was partially purified with Sep-pak C18 solid-phase extraction cartridges using stepwise gradient with increasing the percent of acetonitrile (10%, 60%, 100%) containing 0.1% TFA. The contractile activity was recovered in the 60% acetonitrile fraction. This fraction was further separated by C4 reversed phase, gel-filtration and C18 reversed phase HPLC and a contractile active peptide was purified to homogeneity.
For the characterization of the purified peptide, the molecular weight and amino acid sequence analysis were performed by MALDI-TOF MS and Edman degradation. The molecular weight and partial primary sequence of this material turned out to be 3465 Da and GNAXXKGTXHEIPPGGNNPYYAVLXGEXNT. Comparison of the amino acid sequence with that of known neuropeptides revealed that the SFTN is a novel peptide having contractile activity on the starfish DRM. To confirm the primary structure, cDNA work is in process.
- Author(s)
- 김혜림
- Issued Date
- 2011
- Awarded Date
- 2011. 2
- Type
- Dissertation
- Keyword
- 정제 항균펩타이드 신경성펩타이드 불가사리
- Publisher
- 부경대학교
- URI
- https://repository.pknu.ac.kr:8443/handle/2021.oak/9704
http://pknu.dcollection.net/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000001963961
- Alternative Author(s)
- Kim, Hye Rim
- Affiliation
- 부경대학교 일반대학원
- Department
- 대학원 생물공학과
- Advisor
- 박남규
- Table Of Contents
- 별 불가사리 (Asterina pectinifera) 촉수로부터 항균성 펩타이드의 정제 및 특성
List of Tables Ⅲ
List of Figures Ⅳ
Abstract Ⅹ
Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 4
1. 재료 4
1.1. 실험동물 4
1.2. 시약 및 재료 4
2. 실험방법 4
2.1. 추출 4
2.1.1. 별 불가사리 촉수조직으로부터 항균성 물질의 추출 4
2.2. 항균활성 측정 5
2.2.1. 균주 Stock 제조 5
2.2.2. 배지의 제조 5
2.2.3. 항균활성 측정 6
2.3. 촉수조직 추출물 (RM 60)로부터 항균활성 펩타이드의 정제 6
2.4. 천연 펩타이드의 분자량 및 아미노산 서열 결정 9
2.4.1. 분자량 측정 9
2.4.2. 아미노산 서열결정 9
2.4.3. Disulfide bond 유무 확인 9
2.5. cDNA cloning 9
2.5.1. Total RNA 추출 9
2.5.2. Reverse transcription 10
2.5.3. Primers design 10
2.5.4. 3' RACE cDNA cloning 11
2.5.5. Ligation of PCR products and transformation 12
2.5.6. Colony PCR 12
2.5.7. Preparation of plasmid DNA 13
2.5.8. Sequencing analysis 13
2.6. 펩타이드의 2차 구조 예측 13
Ⅲ. 결과 14
1. 별 불가사리 촉수조직 추출물의 항균활성 측정 14
2. 촉수조직 추출물 (RM 60)로부터 항균활성 펩타이드의 정제 14
3. 정제한 펩타이드의 분자량 및 아미노산 서열 결정 14
3.1 불가사리 촉수 유래의 항균성 펩타이드 SFTA 14
3.2 Disulfide bond 유무 확인 15
4. 3‘ Rapid Amplification cDNA ends (3' RACE-PCR) 15
5. SFTA의 2차 구조 예측 26
Ⅳ. 토 론 29
Ⅴ. 참 고 문 헌 36
별 불가사리 (Asterina pectinifera) 의 촉수로부터 평활근 수축활성을 지닌 신경성 펩타이드의 정제 및 특성
List of Table Ⅷ
List of Figures Ⅷ
Abstract Ⅻ
Ⅰ. 서 론 39
Ⅱ. 재료 및 방법 41
1. 재료 41
1.1. 실험동물 41
1.2. 시약 및 재료 41
2. 실험방법 41
2.1. 추출 41
2.1.1. 별 불가사리 촉수조직으로부터 평활근 수축 물질의 추출 41
2.2. 평활근 수축활성 측정 42
2.2.1. 조직의 표본제작 42
2.2.1.1 불가사리 dorsal retractor muscle (DRM) 42
2.2.2. 수축활성의 측정 42
2.2.2.1. 불가사리 DRM 에 대한 수축활성 측정 42
2.3. 촉수조직 추출물 (RM 60)로부터 평활근 수축활성 펩타이드의 정제 45
2.4. 천연펩타이드의 분자량 및 아미노산 서열 결정 47
2.4.1. 분자량 측정 47
2.4.2. 아미노산 서열결정 47
Ⅲ. 결과 및 토론 48
1. 별 불가사리 촉수조직 추출물의 평활근 수축활성 측정 48
2. 촉수조직 추출물 (RM 60)로부터 평활근 수축활성 펩타이드의 정제 48
3. 정제한 펩타이드의 분자량 및 아미노산 서열 결정 49
3.1. 불가사리 촉수 유래의 평활근 수축성 펩타이드 49
Ⅳ. 참 고 문 헌 58
감사의 글 61
- Degree
- Master
-
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